梅里埃30118难辨梭菌毒素A/B试剂盒VIDAS

难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法）说明书

【产品名称】 通用名称：难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 英文名称：VIDAS C. difficile Toxin A&B

【包装规格】 60 测试/盒

【预期用途】 本产品用于检测人粪便样本中的难辨梭菌毒素 A 和毒素 B。 采用两步酶免夹心法与终点荧光检测相结合技术（ELFA）用于 VIDAS 系列仪器对大便 标本中的难辨梭菌毒素 A 和毒素 B 进行检测。 肠道正常菌群是抑制肠道内病原菌大量繁殖的生物学屏障。由于抗生素的大量应用破坏 了这种屏障保护作用，导致内源性或医院获得性病原菌如难辨梭菌的大量繁殖。 已证实难辨梭菌是抗生素相关伪膜性肠炎(PMC)的主要病原菌。伪膜性肠炎(PMC)是一 种临床常见的与长期大量应用抗生素相关的综合征。肠道的远端部位乙状结肠和直肠病变部 位可形成伪膜性结节和斑块（1，2，3）。若伪膜性肠炎(PMC) 得不到及时诊断和治疗，将 严重威胁病人生命。同时难辨梭菌也是抗生素相关性结肠炎和抗生素相关性腹泻的病原菌 （4）。 难辨梭菌引起的医院获得性感染在某些医院比较严重，易感人群常常是那些住院人数较 多的大型医院病人,接受的病人和长期卧床病人（5，6，7）。同时,婴幼儿和囊性纤维化 (CF) 病人也是无症状难辨梭菌携带者，婴幼儿携带率可达 50%（8），囊性纤维化 (CF)病人达 32% （9）。 难辨梭菌相关性疾病 (CDAD) 有很多临床诊断指标,一般包括 : 超过 36 小时有 6 次以 上未成形大便,抗生素应用 8 周出现腹泻症状，无明显诱因的腹泻以及药物治疗中出现的反 应（10）。 难辨梭菌分为产毒株和非产毒株。产毒株一般同时产肠毒素(毒素 A)和细胞毒素(毒素 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 11733 H-CN- 2014/01 2 B)。 但难辨梭菌某些菌株（如血清型 F）仅产 B 毒素，不产 A 毒素。由于通常的实验方法 仅检测 A 毒素，则可能出现漏诊（2，11）。 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫法）用于协助诊断难辨梭菌相关性疾病 (CDAD)。该试剂可检测大便标本中的难辨梭菌毒素 A 和毒素 B（13）。

【检验原理】 检测采用两步酶免夹心法与终点荧光检测相结合技术（ELFA）。 固相管(SPR)具有两种作用：固相载体和加样。检测试剂随时可用且预先加在了密封的 试剂条内。 仪器自动完成 4 个检测步骤。反应液在 SPR 内外循环数次。每步反应后开始清洗循环 以除去未结合成份。 l 标本中的毒素 A 和/或 B 与 SPR 内面包被的抗毒素 A 抗体（兔多克隆）和 B 抗体（鼠 单克隆）特异性结合。 l 毒素 A 与标记生物素的抗毒素 A 抗体（鼠单克隆）结合，毒素 B 与标记生物素的抗毒 素 B 抗体（鼠单克隆）合物。 l 碱性磷酸酶标记的链霉亲和素与生物素共同孵育以检测生物素。 l 检测：碱性磷酸酶将底物（4-甲基伞形酮磷酸酯）水解为可用 450nm 波长检测的荧光 产物（4-甲基伞形酮）。 荧光强度随标本中毒素 A 和/或 B 的含量升高而升高。 难辨梭菌毒素 A/B(CDAB)检测试验完成后仪器自动分析结果，给出试验值并打印每份 标本的结果。

【主要组成成分】 试剂盒组成：60 测试 60 个试剂条 （CDAB STR） STR 即用型。 60 个固相管 （CDAB SPR） （2 x 30） SPR 即用型。难辨梭菌兔多克隆抗毒素 A 抗体和小鼠单克 隆抗毒素 B 抗体。 1 瓶标准品 （CDAB S1） （1 x 4 mL） （液体） S1 0.05mol/l TRIS 缓冲液（pH7.2）+5% BSA+防腐剂稀释 的难辨梭菌 A 毒素 1 瓶阳性对照品（CDAB C1） （1 x 4 mL） （液体） C1 0.05mol/l TRIS 缓冲液（pH7.2） +5%BSA +防腐剂稀 释的难辨梭菌 A 毒素 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 11733 H-CN- 2014/01 3 试验值范围标在 MLE 数据上：对照品 C1（+）试验值范 围 1 瓶阴性对照品（CDAB C2） （1 x 4 mL） （液体） C2 0.05mol/l TRIS 缓冲液（pH7.2） +5%BSA +防腐剂 试验值范围标在 MLE 数据上：对照品 C2（-）试验值范 围 1 瓶阳性对照品（CDAB C3） （1 x 4 mL） （液体） C3 0.05mol/l TRIS 缓冲液（pH7.2） +5%BSA +防腐剂稀 释的难辨梭菌 B 毒素 试验值范围标在 MLE 数据上：对照品 C3（+）试验值范 围 1 瓶标本稀释液（CDAB R1） （1 x 61mL） （液体） R1 即用型。0.05mol/l TRIS 缓冲液（pH7.2） +50%小牛 血清+去污剂+ 防腐剂 校准试验所需的出厂主体数据质量标准 — MLE 数据（主批次录入）提供于试剂盒中或从  网站下载。 — MLE 条形码打印于盒标签或从  网站下载。 1 份包装说明书在试剂盒中或从  网站下载。 固相管（SPR）： SPR 内壁包被抗难辨梭菌 A 毒素和抗难辨梭菌 B 毒素抗体。SPR 可通过 CDAB 标记识 别。从铝箔袋中取出所需数量 SPR。用后务必密封好铝箔袋。 试剂条（STR）: 试剂条由 10 个孔组成并用铝箔密封。铝箔上标有条形码，内容包括试剂代码、试剂批 号、有效期等信息。第一孔未密封，用于加标本。最后一孔为透明小管用于读取荧光值。中 间八孔内含各种检测试剂。 CDAB 试剂条成份 孔 试剂 1 标本孔 2-3-4 洗液: 0.05mol/L TRIS 缓冲液(pH 7.2)+去污剂+防腐剂(600uL) 5 标记物:生物素标记的鼠抗难辨梭菌 A 毒素抗体+生物素标记的鼠抗难辨梭菌 B 毒 素抗体+防腐剂 (400µL) 6 示踪剂 : 碱性磷酸酶标记的链霉亲和素+0.05 mol/L TRIS 缓冲液(pH 6.0) + 防腐 剂(400 µL) 7-8-9 洗液: 0.05 mol/L TRIS 缓冲液(pH 7.2) +去污剂+防腐剂(600 µL) 10 含底物的透明小管: 4-甲基伞形酮磷酸酯(0.6mmol/L)+二乙醇胺 DEA* (0.62mol/L 或 6.6%) pH9.2 + 1g/l 叠氮钠 (300 µL) *刺激性试剂: - R 36:对眼睛有刺激性。 - S 26:如果接触眼睛, 立即用大量清水冲洗并寻求医生帮助。更多信息请参阅安全条例。 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 11733 H-CN- 2014/01 4 必需但试剂盒中未提供的材料和耗材 - 加样枪带一次性加样头，加样量 300µL ，200µL 和 1000µL。 - 一次性无粉乳胶手套。 - 离心机，大于 12,000×g。 - 聚丙烯或其他合适的离心管，用于标本稀释和离心(容量至少为 1.5 mL)。 - 标本移液管用于量取适量大便标本。 - 涂样棒或涂样环 - 其它特殊材料和耗材，请参见仪器用户手册。 - VIDAS 系列仪器

【储存条件及有效期】 Ÿ 2～8℃储存，有效期 12 个月。 Ÿ 禁止冷冻试剂。 Ÿ 所有未用试剂存于 2～8℃。 Ÿ 打开试剂盒后,检查 SPR 铝箔袋密封是否完好且无损坏。否则,请勿使用 SPR。 Ÿ 为保持 SPRs 稳定性，取出所需 SPR 后请将有干燥剂的袋重新仔细密封并将整个试剂盒放 回 2～8℃。 Ÿ 按推荐的环境储藏试剂盒,可确保所有成份在标注的效期内稳定。

【适用仪器】 - VIDAS 系列仪器: VIDAS mini VIDAS VIDAS 3

【样本要求】 标本类型、采集与储存 根据实验室标准程序采集大便标本并储存于 2～8℃待处理。 标本采集后应尽快送至实验室。 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 11733 H-CN- 2014/01 5 大便标本制备前在 2～8℃可保存最多 3 天 (自采集之日起)，不会明显损失难辨梭菌毒素 A/B。不建议在 2～8℃保存超过 3 天。标本在-25℃±6℃冷冻可保存 1 个月或-70℃（或更低 温度）保存 1 个月以上。避免标本反复冻融。由于肛拭子采集标本量太少，不建议用此方 法。避免使用可能含去污剂、防腐剂或培养基的容器装标本。因为这些成份会干扰难辨梭菌 毒素 A/B 的检测结果。 制备 CDAB 试验的标准、质控和标本 标本 注意: 制备大便标本前充分混匀非常关键。混匀不充分可导致错误结果。为避免发生此问题， 必须混匀大便标本。稀释的标本也必须混匀，有助于保证获得可靠结果。 液体大便： 1、 通过移液管反复抽吸使大便均一化。 用移液管将 200µL 液体大便加入一清洁离心管中； 2、 使用带有一次性吸头的移液器，在离心管中加入 1000µL 标本稀释液（R1）。 3、 通过移液管反复抽吸使大便再次均一化。 然后使用漩涡震荡器*混匀。 确保标本与标本稀释液（R1）*混匀。 4、 离心：2～25℃，最小 12,000 g，离心 5 分钟。 5、 使用带有一次性吸头的移液器，取 300µL 上清用于 VIDAS 难辨梭菌毒素 AB 检测。 注意:离心后如上清表面仍有颗粒物或脂肪，吸取上清时加样头应伸入表面以下。 半固体和固体大便： 1、 为准确取 200mg 半固体或固体大便，首先取 200µL 蒸馏水加入一清洁离心管。此离心 管作为“参照管"。 2、 另取一清洁离心管作为标本管，用洁净木棍挑取一定量大便（200mg）加入标本管，所 取大便体积与“参照管"液面相同即可。 注意：取完固体或半固体大便标本，可丢掉“参管"。 3、 取 1000µl 标本稀释液（R1）加入标本管 4、 用漩涡震荡器*混匀。标本与标本稀释液（R1）一定要混匀。 5、离心：2～25℃，以最小 12,000 g 的速度离心 5 分钟。 6、至少取 300µL 上清用于难辨梭菌毒素 A/B 检测。 难辨梭菌毒素 A/B 检测试剂盒（酶联免疫荧光法） 版本号 11733 H-CN- 2014/01 6 注意: - 离心后如上清表面仍有颗粒物或脂肪，吸取上清时加样头应伸入表面以下。 - 如果半固体标本所含液体成份比固体成份多，标本制备可参考液体大便制备方法（见“标 本：液体大便） 标准和质控： 标准和对照品： 标准品（S1）,阳性对照品（C1、C3）和阴性对照品(C2)必须与病人标本用相同的制备方法 处理。 1， 使用漩涡震荡器混匀。 2， 使用带有一次性吸头的移液器收集 200ul 标准品或对照品品至洁净离心管中。 3， 使用带有一次性吸头的移液器，吸取 1000ul 标本稀释液（R1），加入离心管。 4， 使用漩涡震荡器混匀。 5， 使用带有一次性吸头的移液器，吸取 300uµL 上清用于 VIDAS 难辨梭菌毒素 AB 检测。 已制备标本的保存： 如不能立刻进行难辨梭菌毒素 AB 检测，已制备的标本上清、标准和对照品可在 2～8℃保 存不超过 48 小时。 超过 48 小时的上清、标准和对照品必须丢弃。